过氧化氢酶(CAT)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
规 格:100T/96S
产品内容
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 30mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 125μL×1 瓶,4℃保存。
产品说明
CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,是最主要的 H2O2 清除酶,在活性氧清除系统中具有重要作用。
H2O2 在 240nm 下有特征吸收峰,CAT 能够分解 H2O2,使反应溶液 240nm 下的吸光度随反应时间而下降,根据吸光度的变化率可计算出 CAT活性。
需自备的仪器和用品
紫外分光光度计/酶标仪
台式离心机
可调式移液器
微量石英比色皿/96 孔(UV 板)
研钵
冰和蒸馏水
操作步骤
一、粗酶液提取
细菌、细胞或组织样品的制备
收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;
按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);
8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
血清(浆)样品:直接检测。
二、测定步骤
分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 240nm,蒸馏水调零。
CAT 检测工作液的配制:用时在试剂二中加入 25mL 试剂一,充分混匀,作为工作液。
测定前将 CAT 检测工作液在 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 10min 以上。
准备96孔UV 板一块(非普通酶标板,普通酶标板只能透过可见光,不能透过紫外光,检测波长小于 340nm务必使用UV 板)。
在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 190μL 工作液,立即混匀并计时,记录 240nm 下初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。计算ΔA=A1-A2。
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